Mit dem vorliegenden Heftchen wollen wir oft aus Verbraucherkreisen an uns herangetragenen Wünschen nach einer Zusammenfassung der von uns herausgegebenen Färbemethoden entsprechen. Neben einer Reihe altbekannter Vorschriften finden Sie auch neuere Methoden, soweit diesen ein stärkeres Interesse zuteil wurde. Wir haben aber auch einige seltener angewandte Vorschriften aufgenommen und hoffen damit allen Wünschen gerecht zu werden. Jede Vorschrift wurde nochmals genau durchgeprüft. Alle über Lösung und Färbedauer gemachten Angaben gelten in erster Linie für die von uns gelieferten Farbstoffe. Soweit es uns nötig erschien, haben wir das zur Färbung verwendete Material genannt. Dies schließt natürlich nicht aus, dass auch bei anders geartetem oder fixiertem Material die gleichen Resultate möglich sind.
 

Für Mitteilung beobachteter Mängel oder Verbesserungsvorschläge sind wir stets dankbar. Wir werden diese Hinweise gern in der nächsten Auflage berücksichtigen.
 
 

Natürlich wissen wir, dass viele Färbemethoden sich geändert haben und wir mit unseren Vorschriften nicht unbedingt "up to date" sind. Trotzdem meinen wir, dass es sich durchaus lohnt in den alten Rezepten zu stöbern, weil dort oft verborgene Schätze vorhanden sind, die man auch heute noch gut gebrauchen kann.
 
 

Münster-Roxel, im Juli 2003

WALDECK GmbH & Co. KG, Divison Chroma^®

Fixierungsmethoden
 
 
 
 
 
 

Einbettungsmethoden
 
 
 
 
 
 

Färbemethoden für
 
 

A) Botanik
 
 
 
 

B) Parasitologie

a) pflanzliche Parasiten

b) tierische Parasiten

c) filtrierbare Infektionserreger
 
 
 
 

c) Zoologie
 
 

Jedes dem lebenden Organismus entnommene Material beginnt sehr bald sich Zu verändern. Man versucht deshalb durch verschiedene Mittel den ursprünglichen Zustand zu erhalten, zu fixieren. Für Ausstriche von Blut, Gewebesaft, Bakterienkulturen bedient man sich meist des Alkohols oder der Hitzefixierung. In den vorliegenden Vorschriften wurde die jeweils beste Methode angegeben. Zur Fixierung der Struktur von Gewebeschnitten werden Fixierungslösungen angewendet, von denen die nachstehenden am Häufigsten gebraucht werden. Eine Fixierungslösung, die alle Zell- und Gewebebestandteile gleich gut erhält, gibt es nicht. In den nachstehenden Vorschriften wurde deshalb bei den einzelnen Methoden angeführt, welches Fixierungsmittel jeweils das geeignetste ist.
 
 

A. Ausstrichpräparate:
 
 

Man breitet eine möglichst kleine Menge Untersuchungsmaterial mit Hilfe einer geglühten Platinnadel oder eines Skalpells in möglichst dünner und gleichmäßiger Schicht auf dem Deckglas bzw. auf dem Objektträger aus oder bedient sich zur Ausbreitung der besonders für Blutpräparate empfohlenen folgenden Methode: Man bringt einen möglichst kleinen Tropfen Blut usw. auf einen Objektträger und setzt an den Tropfen einen zweiten Objektträger in spitzem Winkel an. Der Tropfen breitet sich dann längs der Kante des zweiten Objektträgers aus. Nun lässt man diesen langsam auf dem als Unterlage dienenden ersten Objektträger entlang gleiten, wodurch der Tropfen nachgeschleppt und ausgebreitet wird. Reinkulturen oder schwer ausstreichbares Material wird zweckmäßig vorher mit einem Tropfen Wasser verdünnt. Dann lässt man den Ausstrich völlig lufttrocken werden und zieht dann erst das mit einer Cornetschen Pinzette gehaltene Deckglas bzw. den Objektträger, Schichtseite nach oben, dreimal durch die Flamme. Das Trocknen an der Luft wird durch mehrfaches Hin- und Herschwenken der Präparate beschleunigt, die Fixierung der lufttrockenen Präparate kann statt durch Hitze auch durch etwa zehn Minuten währendes Einlegen in Alkohol absolut oder ein Gemisch aus Alkohol absolut und Äther zu gleichen Teilen erfolgen. Die Färbung geschieht am besten durch Auftropfen der Farblösung aus einer Pipette. Die Dauer der Färbung richtet sich nach der Art der Präparate und ist bei den verschiedenen Farblösungen verschieden. Im allgemeinen kommt man mit 15 Sekunden bis 1 Minute aus. Schwaches Erwärmen beschleunigt die Färbung. Soweit sich überhaupt zahlenmäßige Angaben machen lassen, sind diese in den nachstehenden Vorschriften aufgeführt. Nach beendeter Färbung werden die Ausstrichpräparate sorgfältig mit Wasser abgespült, mit Fließpapier abgetupft und getrocknet, was wiederum unter vorsichtigem Erwärmen geschehen kann. Das Präparat wird dann mit einem Tropfen Zedernholzöl versehen und ohne Deckglas betrachtet. Soll ein Dauerpräparat hergestellt werden, so wird mit Canadabalsam oder Malinol ein Deckglas aufgekittet. Sofern besondere Fixierungsmethoden angewendet werden müssen, finden sich die erforderlichen Angaben in den nachfolgenden Vorschriften.
 
 

B. Schnittpräparate:
 
 

Die Dauer der Fixierung ist abhängig von dem Fixierungsmittel und der Art und Größe des Gewebestückes. Soweit sich überhaupt Angaben machen lassen, wurden diese bei den nachstehenden Fixierungsgemischen angegeben.

Pikrinsäure 1% ig wässrig 15 ccm

Formalin 37% 5 ccm

Eisessig 1 ccm

Die Mischung der 3 Bestandteile erfolgt erst vor dem Gebrauch. Fixierungsdauer je nach Größe 2 - 24 Stunden, längere Einwirkung schadet nicht. Nach der Fixierung wird sofort in 70 - 80% igen Alkohol übertragen, der 2 - 3 mal gewechselt wird.
 
 

Chloroform 30 ccm

Eisessig 10 ccm

Die Lösung dringt sehr rasch ein. Objekte von 1 - 2 mm sind schon in einer Stunde fixiert. Größere Stücke brauchen nicht länger als höchstens 3 Stunden. Darüber hinaus sollte nicht fixiert werden, da sonst zu starke Schrumpfungen auftreten und die Präparate zu hart werden. Nach der Fixierung überträgt man gleich in absoluten Alkohol, der nach 24 Stunden einmal gewechselt wird.
 
 

Chromsäure 1 %ig 15 ccm

Osmiumsäure 2 %ig 4 ccm

Eisessig 1 ccm

Das Fixierungsgemisch dringt nur langsam ein. Man nimmt deshalb möglichst dünne, kleine Stücke von höchstens 1 - 3 mm Seitenlänge und lässt sie 24 Stunden oder länger in der Lösung verweilen. Man wäscht in Wasser gründlich aus und härtet in Alkohol nach, indem man die Stücke je 24 Stunden in 40% igen, dann 70% igen, darauf 90% igen und schließlich absoluten Alkohol bringt. Haematoxylin-Färbungen sind nach Flemming-Fixierung nicht möglich.
 
 

Wasser dest. 100 ccm

Kleinere Stücke verweilen in der verdünnten Formalinlösung 4, 6, 8 Stunden. Größere Stücke lässt man mehrere Tage darin liegen. Längerer Aufenthalt schadet nichts. Es folgt gründliches Auswaschen in Wasser, Nachhärten in steigendem Alkohol wie unter
3. angegeben. Die Fixierung kann auch im Brutschrank bei 40 - 50° C erfolgen, wodurch die Fixierung meistens schon in 10 - 15 Minuten beendet ist.
 
 

Alkohol 80 %ig 20 ccm

Fixieren 1 - 2 Tage, größere Stücke noch länger, auswaschen in 80 %igem Alkohol. Besonders empfehlenswert für stark bluthaltiges Material, da die Granula der Leukocyten und die Körner der Mastzellen besser erhalten bleiben als in Alkohol allein.
 
 

Natriumchlorid 0,5 g

Wasser 80 ccm

Formalin 37 %ig 20 ccm

Fixierungsdauer 2 - 24 Stunden, nachbehandeln in 70 %gem, 90 %igem und schließlich absolutem Alkohol. Das Gemisch ist sehr gut geeignet zur Fixierung bindegewebsreicher Organe. Das Protoplasma wird in ihm besser erhalten als in reinem Sublimat.
 
 

Kaliumbichromat 2,5 g

Natriumsulfat krist. 1,0 g

Wasser dest. 100 ccm

Formalin 37 %ig 5,0 ccm

Das Formalin wird erst unmittelbar vor dem Gebrauch zugefügt. Die Fixierungsdauer beträgt

beträgt 1 - 6 Stunden. Bei haematologischen Untersuchungen soll diese Zeit nicht überschritten werden. Man wähle deshalb die Stücke nicht zu groß, etwa 2 - 4 mm dick. Bei längerer Einwirkung (1 – 2 Tage) gelingt auch die Darstellung der Mitochondrien. Die Blutzellen und ihre Granulationen bleiben in dem Hellyschen Gemisch besser erhalten als in der Zenkerschen Lösung. 8. Müller

Kaliumbichromat 2,5 g

Natriumsulfat krist 1,0 g

Wasser dest 100 ccm

Fixieren nicht länger als 24 Stunden, empfindliches Gewebe nur 12 Stunden, auswaschen in fließendem Wasser, nachhärten in steigendem Alkohol.

Formalin 37 %ig, neutral 20 ccm

Der Formalinzusatz erfolgt erst unmittelbar vor dem Gebrauch. Fixierungsdauer 4 Tage, jeden Tag Lösung erneuern. Dann wird 8 Tage in 3 %iger Kaliumbichromatlösung nachchromiert. Hierauf folgt 24-stündiges Auswaschen in Wasser. Darauf wird in steigendem Alkohol entwässert und in Paraffin eingebettet. Das Gemisch ist besonders zur Darstellung der Mitochondrien zu empfehlen.
 
 

Formalin 37 % 20 ccm

Eisessig 4 ccm

Das Gemisch fixiert sehr gut und dringt rasch ein, so dass auch größere Stücke gut fixiert werden. Nachbehandlung: Übertragen in 90%igen Alkohol.

Sublimat 4,5 g

Kochsalz 0,5 g

Trichloressigsäure 2,0 g

Eisessig 4,0 ccm

Wasser dest 80,0 ccm

Formalin 37 %ig 20,0 ccm

Die Fixierungsdauer beträgt je nach Größe des Stückes 1 - 24 Stunden. Nach der Fixierung wird sofort in 90 %igen Alkohol übertragen, der mehrmals gewechselt wird. Das Gemisch dringt sehr rasch ein, die Färbbarkeit des Gewebes ist sehr gut.

Sublimat 5,0 g

Kaliumbichromat 2,5 g

Natriumsulfat krist 1,0 g

Wasser dest. 100,0 ccm

Kurz vor dem Gebrauch zufügen: Eisessig 5,0 ccm

Fixieren dünner Stücke 24 Stunden, gründlich auswaschen in Wasser, am besten 24 Stunden in fließendem Wasser. Nachhärten in steigendem Alkohol. Bei Sublimat enthaltenden Fixierungslösungen ist es bisweilen empfehlenswert, bei gründlichem Auswaschen aber nicht unbedingt nötig, etwa vorhandene Sublimatrückstände durch Jod zu entfernen. Zu diesem Zweck setzt man dem zur Nachhärtung bestimmten 70 %igen Alkohol soviel alkoholische Jodlösung zu, dass er eine weinrote Farbe erhält. Das Jod entfernt durch Bildung von Quecksilberjodid das überschüssige Sublimat und der Alkohol entfärbt sich. Bleibt der Alkohol gefärbt, so ist kein Sublimat mehr vorhanden.

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Das fixierte Material besitzt nicht immer die zum Schneiden auf dem Mikrotom nötige Festigkeit oder es enthält größere Hohlräume, die beim Schneiden deformiert würden. Deshalb werden die Objekte vor dem Schneiden mit einem Medium durchtränkt, das ihnen nach dem Erstarren eine gut schneidbare Beschaffenheit gibt. Die gebräuchlichsten Einbettungsmittel sind Paraffin und Celloidin, zu denen sich in neuerer Zeit für bestimmte Zwecke die Polyaethylenglycole gesellen.

Paraffin: Paraffin gestattet die Herstellung sehr dünner Schnitte (1 – 5 µ). Serien lassen sich leichter von Paraffinmaterial als von Celloidinmaterial anfertigen. Die Paraffineinbettung ist rasch und einfach durchzuführen. In Paraffin eingebettete Objekte können beliebig lange aufbewahrt werden. Ein Nachteil des Paraffins besteht jedoch darin, dass das Material während der Durchtränkung eine beachtliche Schrumpfung (8 - 20 %) erfährt.

Celloidin: Die Celloidineinbettung ist schonender und erlaubt wegen der Durchsichtigkeit des Celloidins eine bessere Orientierung an den eingebetteten Objekten. Schrumpfungs-erscheinungen treten bei Celloidineinbettung nicht auf. Als Nachteile sind jedoch zu erwähnen, dass der Einbettungsvorgang länger dauert als bei Paraffin, die Anfertigung von lückenlosen Serien schwieriger ist. In Celloidin eingebettetes Material darf wegen der Eintrocknungsgefahr nie längere Zeit offen an der Luft liegen bleiben. Die Aufbewahrung von Celloidinmaterial muss in 70 %igem Alkohol erfolgen. Celloidin wird meist für Knochen, Nervensystem, dicke Schichten glatter Muskulatur, Haut und Material mit größeren Hohlräumen verwendet.

Polyaethylenglycol: In Amerika als Carbowax, in England als Aquax bezeichnet. Wir haben aus der Vielzahl der lieferbaren Polyaethylenglycole eine Auswahl der für die Mikroskopie am besten geeigneten Qualitäten getroffen, die wir unter dem Namen Histowachse in den Handel bringen. Wir liefern Histowachs in verschiedenen Härtegraden, die sich untereinander beliebig mischen lassen. Der Vorteil der Einbettung in Histowachs besteht darin, dass bei dem ganzen Einbettungsvorgang Alkohol, Xylol und andere fettlösende Mittel vermieden werden, so dass Lipoide und Fette nicht durch die Behandlung verloren gehen. Schrumpfungen wie bei Paraffineinbettung werden weitgehend vermieden. Eine Nachbehandlung der Schnitte mit Fermenten ist möglich. Die Einbettung dauert nur etwa 1 ½ Stunden, so dass die Präparate in kurzer Zeit fertiggestellt werden können. Histowachs ermöglicht Schnitte bis zu 0,1 µ.

Paraffineinbettung:

1. Die fixierten Stücke gründlich entwässern in Alkohol absolut.
2. Alkohol entfernen durch einlegen in Xylol, das 1 - 2mal gewechselt wird, für

30 - 180 Minuten. Die Stücke bleiben nur solange in Xylol, bis sie völlig
durchsichtig bzw. durchscheinend geworden sind, bei zu langem Aufenthalt
werden sie leicht spröde.
3. Übertragen für 2 - 3 Stunden in Xylol, das mit Paraffin gesättigt war.
4. Stücke übertragen in reines, geschmolzenes Paraffin, das nach 30 Minuten

gewechselt wird, um die Stücke völlig xylolfrei zu erhalten. In dem zweiten
Paraffin verbleiben die Stücke, je nach ihrer Größe 2 -5 Stunden. Für die
meisten Objekte genügt, wenn sie bei Zimmertemperatur geschnitten werden
sollen, ein Paraffin vom Schmelzpunkt 50/52° C. Kleine Differenzen in der
Härte, die sich beim Schneiden bemerkbar machen, kann man dadurch
ausgleichen, dass man in einem kühleren oder wärmeren Raum (am Fenster
oder in der Nähe des Ofens) schneidet oder, dass man das Messer abkühlt
oder erwärmt.

5. Nunmehr erfolgt die Einschmelzung. Diese geschieht, indem man Paraffin

vom gleichen Härtegrad frisch schmilzt und in ein Blockschälchen oder einen
Paraffinrahmen gießt. Nun entnimmt man das Präparat mit erwärmter
Pinzette und ordnet es so in dem flüssigen Paraffin, dass die Seite, die zuerst
geschnitten werden soll, nach unten kommt. Darauf wird weiteres geschmol
zenes Paraffin aufgegossen, bis es das Objekt um 2 - 3 mm überragt. Hierauf
wird das Gefäß in kaltes, eventuell mit Eis gekühltes Wasser gesetzt, damit
das Paraffin zunächst von unten und von den Seiten her erstarrt. Dadurch
können kleine, im Paraffin enthaltene Luftblasen an die Oberfläche steigen
und hier entweichen. Sobald sich an der Oberfläche ein dickes Paraffin-
häutchen gebildet hat, taucht man das Schälchen ganz unter, damit das
Paraffin nunmehr rasch vollständig erstarrt.
6. Darauf wird der Paraffinblock aus dem Schälchen oder Rähmchen gelöst und

das Paraffin mit dem Messer soweit entfernt, dass nur ein 1 - 2 mm breiter
Paraffinrand das Objekt umgibt.
7. Der zurechtgeschnittene Block wird auf einem Stück hartem Holz oder

Stabilit durch Anschmelzen befestigt und darauf die Unterlage in die Mikro-
tomklammer fest eingeschraubt. Das Schneiden erfolgt nach den verschiedenen,
den einzelnen Mikrotomen beigefügten Vorschriften.

8. Die fertigen Schnitte werden mit einem schmalen Messer, Präparierspatel oder

Pinsel von dem Mikrotommesser in 45 - 50° C warmes Wasser gebracht,
worin sich faltige oder gerollte Schnitte schnell glatt ausbreiten. Die Schnitte
werden dann durch einen unter sie geschobenen Objektträger aufgefangen,
und zwar so, dass die dem Messer zugekehrt gewesene, glänzende Fläche des
Schnittes auf das Glas zu liegen kommt. Sie legen sich glatt und faltenlos an
die Glasfläche an. Voraussetzung dabei ist die Verwendung absolut reiner,
fettfreier Objektträger.
9. Überschüssiges Wasser lässt man durch Schrägstellen des Objektträgers ab-

laufen oder versucht es durch vorsichtiges Auflegen von Fließpapier hervor-
zudrücken oder abzusaugen.

10. Hierauf kommen die Objektträger in den Brutofen von 37° C, wo sie wenigstens

6 Stunden verweilen. (Nicht in den Paraffinofen.)
11. Bei Material, das in chromsäurehaltigen Lösungen gehärtet oder mit Silber

lösungen behandelt wurde oder das viel Blut enthält, versagt bisweilen das
Aufkleben durch Kapillarattraktion, wie man die unter 8 genannte Auf
klebemethode nennt. Derartiges Material muss mit Eiweißglycerin aufgeklebt
werden. Man geht dabei in folgender Weise vor: Auf einem gut gereinigten
Objektträger verreibt man eine Spur Eiweißglycerin und erwärmt über der
Flamme, so dass eine Temperatur von 70° C erreicht wird. Auf den abgekühl
ten Objektträger gießt man reichlich dest. Wasser auf und bringt den Schnitt
auf den Wasserspiegel, auf dem er sich meistens völlig glättet. Bleiben noch
einige Falten, so erwärmt man über einer Flamme, aber ohne dabei den
Schmelzpunkt des Paraffins zu erreichen. Dann saugt man mit Fließpapier
das überschüssige Wasser ab und bringt den Objektträger für 3 - 4 Stunden
in den Brutschrank, wie unter 10. angegeben.
12. Die Entfernung des Paraffins aus dem Schnitt wird dadurch erreicht, dass

man den Objektträger zunächst für 5 - 10 Minuten in Xylol und dann 10 Minuten
in absoluten Alkohol bringt, der vorteilhaft einmal gewechselt wird. Die
Schnitte können zur größeren Sicherheit der Paraffinentfernung mit Xylol
bedeckt kurze Zeit in den Thermostaten gestellt werden. Die Temperatur
soll jedoch nicht höher als der Schmelzpunkt des verwendeten Paraffins sein.
Nunmehr sind die Schnitte zur Färbung fertig. Werden wässrige Farblösungen
verwendet, so ist es empfehlenswert, die Schnitte aus dem absoluten Alkohol
erst in 90 %igen, dann in 60 %igen Alkohol Zu übertragen und dann erst
in Wasser zu bringen.

Das fixierte und gut gewässerte Material kommt in
 
 

1. Alkohol 96 %ig 24 Stunden
2. Alkohol absolut (1 mal wechseln) 24 Stunden
3. Äther-Alkohol Zu gleichen Teilen 24 Stunden
4. Celloidin-Lösung 4 %ig 3—6 Tage
5. Celloidin-Lösung 8 –10 %ig 3—6 Tage.

Nach etwa 3 - 5 Tagen ist das Celloidin so hart geworden, das es sich mit dem Fingernagel kaum noch eindrücken lässt. Nun schneidet man den Block aus dem Schälchen heraus und entfernt mit dem Messer das Celloidin soweit, das es die Ränder des Gewebestückes nur noch um 1 - 2 mm überragt. Den so gerichteten Block legt man für 24 Stunden in 70 %igen Alkohol zur Nachhärtung.

Zum Aufkleben auf den Holzblock bringt man auf diesen einige Tropfen dickes Celloidin, setzt den gerichteten und gut abgetrockneten Celloidinblock darauf und lässt an der Luft fest werden. Nach einer Viertelstunde legt man das Ganze in 70 %igen Alkohol. Nach einer weiteren halben Stunde kann geschnitten werden.

Nicht aufgeklebte Celloidinschnitte dürfen nie in einen Alkohol von mehr als 96 % gebracht werden, da das Celloidin sonst aufgelöst wird. Zum Aufkleben bringt man den Schnitt aus
70 %igem Alkohol auf einen mit Eiweißglycerin vorbereiteten Objektträger. Dann wird der Alkohol mit Fließpapier abgetupft, Nelkenöl aufgetropft und nach 3 - 5 Minuten durch Abtrocknen mit Fließpapier das Nelkenöl wieder entfernt. Nun kommt der aufgeklebte Schnitt für je 2 Minuten in
 
 

1. Fixiertes oder unfixiertes Material in Stücken von 2 - 5 mm kurz mit Wasser waschen und auf Fließpapier leicht abtrocknen, um möglichst wenig Wasser in das Histowachs zu übertragen.
2. Einlegen der Materialstücke in reines Histowachs (gewöhnlich Histowachs von

52 - 54° C).
3. Sobald das Objekt untergesunken ist, nach ca. ½ Stunde, Histowachs erneuern. Das Untersinken ist ein Zeichen dafür, das das Histowachs vollständig in das Objekt eingedrungen ist. Die Erneuerung bezweckt, möglichst wenig Wasser mit in den Block zu bringen. Die Einbettungstemperatur soll konstant bleiben. Es genügt, wenn sie 2° C über dem Schmelzpunkt der verwendeten Histowachsmischung liegt.
1. Kurz vor dem Gießen des Blocks wird das Histowachs nochmals erneuert.
2. Etwa nach insgesamt 1 ½ Stunden kann der Block, wie bei Paraffineinbettungen üblich, gegossen werden.
3. Unmittelbar nach dem Gießen wird der Block in den Eisschrank gebracht, wo er in wenigen Minuten erstarrt, damit ist er zum Schneiden fertig. Um eine nachträgliche Erweichung des Blockes durch Luftfeuchtigkeit zu verhindern, erfolgt Aufbewahrung am besten in Gläsern mit eingeschliffenem Glasstopfen.

7. Schnitte mit feiner Nadel übertragen in Wasser, dem vorher ein oberflächen ent-spannendes Mittel (ca. 0,2 % Osatin-Chroma) zugefügt wurde. Das Wasser muss entspannt sein, damit die feinen Schnitte auf der Wasseroberfläche nicht zerrissen werden. Histowachs löst sich augenblicklich. Die Schnitte sinken glatt ausgebreitet auf den Boden des Gefäßes.
8. Für elektronenmikroskopische Untersuchungen werden die Schnitte unmittelbar aus dem entspannten Wasser mit der befilmten Objektblende aufgefischt. Nach dem Auf-trocknen des Schnittes auf der Blende werden etwa vorhandene Verunreinigungen durch kurzes Waschen in dest. Wasser entfernt.

10. Für histologische Untersuchungen werden die Schnitte aus dest. Wasser auf Objektträger mittels Eiweißglycerin aufgezogen.
11. Falls die Färbung nicht gleich vorgenommen wird, werden die beschickten Objektträger in 50 %igem Alkohol aufbewahrt. Zur Färbung eignen sich Haemalaun-Eosin, Resorcinfuchsin, Azan, Sudan III, Toluidinblau, Versilberung nach Gömöri.
12. Sofern Imprägnationsmethoden oder Beizenfarbstoffe angewendet wurden, schließt man am besten in Glyceringelatine oder Gelatinol ein, weil hierbei Schrumpfungen am ehesten vermieden werden.
13. Werden die üblichen wasserlöslichen Farbstoffe verwendet, die in ein wasserhaltiges Einschlussmittel hinein-iffundieren würden, werden die Präparate m besten aus 80 %igem Alkohol über Terpineol in Balsam oder Malinol eingeschlossen. Wenn höhere Alkohol-konzentrationen vermieden werden, was bei der vorstehenden Methode der Fall ist, treten keine wesentlichen Schrumpfungen auf.

 

Gefrieren des zu untersuchenden Materials ist die einfachste und schnellste Methode, um die Stücke schneidbar zu machen. Man kann das frische Material direkt gefrieren lassen, besser ist es aber vorher in Formol zu fixieren und in Wasser gründlich auszuwaschen. Als Gefriermittel dienen flüssige Kohlensäure, Chloräthyl oder Äther. Zur Anfertigung der Schnitte bedarf es eines Gefriermikrotoms oder wenigstens eines Gefriertisches, der sich auf ein gewöhnliches Mikrotom aufsetzen lässt. Die Stücke sollen nicht dicker als 1 - 2 mm sein, da die obersten Schichten sonst nicht genügend gefrieren. Splittern die Schnitte beim Schneiden, so ist das Objekt zu stark gefroren. Man muss es dann, etwa durch Betupfen mit dem Finger, etwas zum Auftauen bringen. Dünnste Schnitte und Schnittserien sind mit der Gefriermethode kaum zu erzielen.Man verwendet sie deshalb hauptsächlich bei Schnelldiagnosen und Spezial-untersuchungen, z. B. bei Fett- und Nervengewebe

A. Astrablau FM 0,5 g

C. 1 g Safranin O in 100 ml dest. Wasser

1. Entparaffinierte Schnitte aus Wasser übertragen für 1 - 5 Minuten in A.
2. Abspülen mit dest. Wasser.
3. Färben in B 1 - 5 Minuten, die Schnitte besitzen nun einen grünlichen Ton.
4. Abspülen in dest. Wasser.
5. Färben 1 - 5 Minuten in C.
6. Abspülen in dest. Wasser.
7. Entwässern in dreimal gewechseltem Aceton.
8. Über Phenol-Benzin 1 :3 einschließen in Balsam oder Malinol.

und Safranin.

Lit.: Maácz und Vágás, "Mikroskopie" Bd. 16 (1961), S. 40 - 43.
 
 

1. Färben der Schnitte 1 - 2 Minuten in A.
2. Abspülen in dest. Wasser.
3. Entwässern in B.
4. Durch Xylol überführen in Xylol-Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösungen:
 

1. Färben der Schnitte wenigstens 2 Stunden in A.
2. Gründlich auswaschen mit Leitungswasser.
3. Differenzieren in B.
4. Färben 2 Stunden in dem Gemisch von B und C.
5. Waschen in Alkohol absolut, 10 Sekunden.
6. Aufhellen in Nelkenöl.
7. Übertragen in Xylol.
8. Einschließen in Balsam oder Malinol.

Verholzte oder kutinisierte Wände hellrot, Cellulosewände blau gefärbt.

Lit.: Johansen, 1940, Plant Microtechnique, 1. Ausgabe.
 
 

Erforderliche Lösungen:
 
 

A. Gesättigt wässrige Lösung von Auramin O frisch hergestellt.

1. Färben der Schnitte 5 - 10 Minuten in dem Gemisch von A und B.
2. Kurz abspülen in dest. Wasser.
1. Differenzieren in einmal gewechseltem absoluten Isopropylalkohol, abtrocknen mit Filterpapier.
2. Übertragen in zweimal gewechseltes Terpineol.
3. Einschließen in Malinol.

1. Schnitte 5 - 15 Minuten färben in dem Gemisch von A und B.
2. Kurz in einmal gewechseltem Isopropylalkohol abspülen.
3. Abtrocknen mit Filterpapier.
4. Übertragen in zweimal gewechseltes Terpineol.
5. Einschließen in Malinol.

Holzmenbranen rot, Cellulose blau gefärbt.

Lit.: Wie vorstehend.
 
 

A. Malachitgrün 0,5 g

1. Schnitte aufkleben.
2. Färben in Lösung A, 10 Minuten.
3. Waschen in 96 %igem Alkohol.
4. Aufhellen in Karbol-Xylol, über Xylol einbetten in Balsam oder Malinol.

1. Fixieren in Lösung A, 24 - 48 Stunden.

2. Schneiden auf 50 - 100 µDicke, einlegen in 50 %igem Alkohol.

3. Extrahieren in Aceton, 5 Minuten.

4. Bleichen in Lösung B, 5 Minuten.

5. Verseifen in Lösung C, 15 Minuten.

6. Spülen mit 50% igem Alkohol, 3 mal.

7. Färben in Lösung F, 30 Minuten bei 55° C.

8. Spülen in 50 %igem Alkohol, 2 mal.

9. Einbetten in Malinol.

Färbeergebnis:

Cellulose und Cytoplasma: hellrot
Holzgewebe und Kork: orangerot
Gummi: blau

Lit.: Addicott, F.T. (1944), Stain Tech., 19: 99 - 102.

A. Safranin 1 g

1. Färben der Schnitte in Lösung A, 5 -10 Minuten.
2. Waschen in Wasser.
3. Entwässern in aufsteigender Alkoholreihe.
4. Gegenfärben mit Lösung B, 2 - 5 Minuten (Mikroskopkontrolle).
5. Aufhellen in Nelkenöl.
6. Waschen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

1. Entparaffinieren wie üblich.
2. Färben in A etwa eine Stunde.
3. Entwässern in der aufsteigenden Alkoholreihe.
4. Differenzieren in B.

5. Abspülen in Alkohol absolut.
6. Über Xylol einschließen in Balsam oder Malinol.

1. Dünne Griffel oder Fruchtknoten leicht befeuchten mit Wasser und zwischen

2 Objektträgern zerquetschen oder von stärkeren Griffeln oder Fruchtknoten
von Hand Längsschnitte anfertigen und dann zerquetschen.
2. Das auf einem Objektträger ausgebreitete Material mit der obigen Lösung

bedecken und 2 - 5 Minuten einwirken lassen
3. Überschüssige Farblösung vorsichtig absaugen oder mit wenig Wasser

abspülen
4. Deckglas auflegen, andrücken und bei starker Beleuchtung unter dem

Mikroskop betrachten
5. Falls Dauerpräparate erwünscht, Deckglas mit Deckglaskitt oder Deckglaslack

umranden.

Erforderliche Lösung:

1. Etwas Tusche mit der gleichen Menge dest. Wassers innig vermischen.
2. Einen Tropfen der verdünnten Tusche auf einen Objektträger bringen,

etwas Blütenstaub daneben schütten und gut miteinander verreiben.
3. Den Tropfen mit Hilfe eines zweiten Objektträgers oder eines Deckglases

möglichst dünn ausstreichen und an der Luft trocknen lassen.
4. Bei starker Beleuchtung unter dem Mikroskop betrachten.

1. Fixieren des Materials in A.
2. Übertragen in ein Gemisch aus gleichen Teilen Alkohol und konzentr.

Salzsäure für 5 Minuten, gründlich auswaschen in reinem Alkohol.
3. Auf einen mit Eiweißglycerin bestrichenen Objektträger bringen.
4. Färben 3 - 4 Minuten mit einem Gemisch aus gleichen Volumteilen B und

Essigsäure 45 %ig.
5. Material mit einem zweiten Objektträger fest andrücken und die aus

tretende Flüssigkeit mit Filtrierpapier absaugen.
6. Die mit dem Material beschickten beiden Objektträger fest mit Fließ

papier umhüllen, das in 95 %igem Alkohol getränkt ist, in eine Petrischale
legen und abdecken.
7. Nach 5 Stunden das Fließpapier entfernen und in Alkohol einlegen, bis sich

die Objektträger leicht trennen lassen. Das Material haftet jetzt fest an dem
aufgetragenen Eiweißglycerin.
8. Abtropfen lassen und einschließen in Euparal.

Färbevorschrift:

1. Die entparaffinierten Schnitte aus Wasser übertragen in A für 30 Minuten.
2. Waschen in fließendem Wasser für 10 Minuten.
3. Färben 30 - 60 Minuten in B.
4. Waschen 10 Minuten in fließendem Leitungswasser.
5. Differenzieren in C, Mikroskopkontrolle.
6. 20 Minuten waschen in fließendem Leitungswasser.
7. Entwässern in der aufsteigenden Alkoholreihe und dabei zu dem 70 %igen

Chromosomen sind bläulichschwarz gefärbt und gut differenziert.
 
 

Lit.: Hutner, Stain Technology, 9, 57 - 59

A. 1 %ige wässrige Lösung von Safranin

B. 1 %ige wässrige Lösung von Gentianaviolett

C. 0,5 %ige wässrige Lösung von Orange G

Verwendetes Material: Wurzelspitzen, z. B. von Vicia Faba, zarte Längsschnitte.

Fixierung am Besten in Chromosmiumessigsäure nach Flemming.

Färbevorschrift:

1. Entparaffinieren der Schnitte in der üblichen Weise.
2. Färben 1 - 3 Stunden in A.
3. Abspülen in dest. Wasser.
4. Übertragen für etwa 2 - 5 Minuten in B.
5. Abspülen mit dest. Wasser.
6. Auftropfcn von C.
7. Nach etwa 1 - 5 Minuten abspülen mit Wasser.
8. Entwässern in 96 %igem Alkohol.
9. Wenn die letzten Farbwolken entweichen, Objektträger schnell mit Nelken

öl oder Terpineol bedecken und unter dem Mikroskop prüfen, ob die
Färbung gelungen ist.

Ist die Färbung gelungen, so sind in sich teilenden Zellen die Chromosomen leuchtend rot, der Nucleolus rot mit meist bläulichem Anflug gefärbt. Die Spindelfasern erscheinen blau, das Plasma bräunlichgelb gefärbt.

Lit.: Flemming, W., 1891, Arch. mikr. Anat, 37, 249 - 298
 
 

Carmin-Essigsäure nach Schneider.

Verwendetes Material: Wurzelschnitte.
 
 

Färbevorschrift:

1. Wurzelschnitte von etwa 0,5 cm Länge zwischen Holandermark in dünne

Längsschnitte zerlegen.
2. Schnitte auf dem Objektträger mit Carmin-Essigsäure bedecken.
3. Großes Deckglas auflegen und Präparate über kleiner Flamme etwa

10 Sekunden bis Zum Aufkochen der Essigsäure erhitzen.
4. Nach dem Abkühlen die Schnitte, wenn nötig etwas quetschen und unter

dem Mikroskop betrachten.

1. Schnitte auf dem Objektträger mit Methylgrün-Essigsäure übergießen,

kurz einwirken lassen
2. Rasch abspülen mit Wasser, dem eine Spur Essigsäure zugesetzt wurde
3. Überschüssige Flüssigkeit mit Filtrierpapier absaugen, Deckglas auflegen

und unter dem Mikroskop betrachten

Färbeergebnis:

1. Schnitte einbringen in 50 %igen Alkohol.
2. Färben mit Lösung A, 30 - 60 Minuten.
3. Waschen mit Alkohol.
4. Differenzieren mit Lösung B, 30 Sekunden.
5. Waschen mit Alkohol.
6. Aufhellen in Nelkenöl, einbetten in Balsam oder Malinol.

b) tierische Parasiten

c) filtrierbare Infektionserreger
 
 

Erforderliche Lösungen:

A. Carbolgentianaviolettlösung

B. Jod-Jodkaliumlösung 1 : 2 : 300

C. Carbolfuchsin 1 Teil

1. Nach Fixierung unter leichtem Erwärmen mit Lösung A färben, 1 - 3 Minuten
2. Abgießen der Farblösung (nicht abspülen).
3. Übertragen in Lösung B für 1 - 3 Minuten.
4. Abgießen der Farblösung.
5. Entfärben mit Alkohol 96 %ig, bis keine Farbwolkcn mehr abgehen, etwa 15 Sekunden.

6. Nachfärben mit Lösung C, 5 - 30 Sekunden.
7. Kurz spülen mit Wasser, trocknen.
8. Einschließen in Canadabalsam oder Malinol.

Grampositive Bakterien: schwarzblau

Gramnegative Bakterien: rot

1. Aufkleben der Schnitte, entparaffinieren.
2. Färben in Lösung A, 2 - 5 Minuten.
3. Farblösung abgießen (nicht abspülen).
4. Übertragen in Lösung B für 1 - 2 Minuten.
5. Entfärben mit 90%igem Alkohol, bis keine Farbwolken mehr abgehen.
6. Abspülen mit Wasser.
7. Nachfärben mit Lösung C.
8. Spülen mit 60 %igem Alkohol.
9. Entwässern mit absolutem Alkohol.
10. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Grampositive Bakterien: schwarzblau

Gramnegative Bakterien: braun

Grampositiv sind:

Erforderliche Lösungen:

1. Schnitte aus absolutem Alkohol auf Objektträger übertragen, wässern, fixieren.
2. Färben in Lösung A, 2 Minuten (einmal bis zur Dampfbildung über der

Flamme erwärmen).
3. Farblösung abgießen, nachspülen mit Wasser.
4. Differenzieren mit Lösung B.
5. Spülen in Wasser.
6. Entwässern mit Lösung C (mehrmals wechseln), 3 - 5 Minuten.
7. Übertragen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

1. Vermischen einer kleinen Menge Reinkultur mit der gleichen Menge

Wasser und auf einem vollkommen fettfreien Objektträger ausstreichen.
2. Trocknen durch dreimaliges Ziehen hoch über der Flamme.
3. Auftropfen der Beize durch ein Papierfilter.
4. Beize unter gelindem Erwärmen einwirken lassen, 1 Minute.
5. Abspülen mit Wasser.
6. Nachfärben mit Lösung B unter gelindem Erwärmen, 3 - 5 Minuten
7. Abspülen mit Wasser.
8. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösung:

A. Carbolfuchsin 1 Teil

1. Ausstriche fixieren
2. Färben in Lösung A, 5 - 10 Minuten.
3. Spülen in Wasser.
4. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösungen:

1. Färben in Lösung A, 5 - 30 Minuten.
2. Spülen in Wasser.
3. Differenzieren in Lösung B.
4. Übertragen in Alkohol 90 %ig, 2 - 5 Minuten.
5. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Färbung nach Frosch (Ausstrichpräparate)

Erforderliche Lösungen:

1. Fixieren in Alkohol absolut.

2. Färben in Lösung A, 10 - 30 Sekunden.

3. Gegenfärben und differenzieren in Lösung B, bis das Präparat (bei un
gleichmäßigen Ausstrichen in seinen dünneren Teilen) einen grünblauen
Farbton angenommen hat

4. Spülen in Lösung C.

5. Trocknen mit Fließpapier, einschließen in Balsam oder Malinol.
 
 

Färbeergebnis:

Rotzbazillen: leuchtend rot

Erythrocyten: grün
 
 

Anm.: Die Färbung misslingt bei altem, faulen Material und sehr alten Ausstrichen.
 
 

Färbung nach Hansen (Ausstrichpräparate)
 
 

Erforderliche Lösungen:

A. Methylenblau nach Löffler

B. Safranin 3 %ig wässrig
 
 

Färbevorschrift:

1. Hitzefixierung.
2. Färben in Lösung A, 1 Minute.
3. Spülen in Wasser.
4. Nachfärben in Lösung B, 15 - 20 Sekunden.
5. Spülen in Wasser.
6. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösung: A. Carbolthionin(Thionin 1 g Phenol 5 g Ethanol absolut, 50 ml Wasser 500 ml pulverisieren thionin mit Alkohol, zusetzen: Phenol und Wasser; filtrieren.)
 
 
 
 

Färbevorschrift:

1. Färben der Schnitte (Paraffinschnitte) in Lösung A, 2 - 5 Minuten.
2. Spülen in Wasser.
3. Entwässern in Alkohol absolut.
4. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Färbung nach Claudius (Ausstrichpräparate)

Erforderliche Lösungen:

2. Spülen in Wasser.

3. Trocknen zwischen Fließpapier.

4. Übertragen in Lösung B, 1 Minute.

5. Spülen in Wasser.

6. Trocknen zwischen Fließpapier.

7. Differenzieren in Nelkenöl.

8. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösungen:

A. Safranin in Anilinwasser (analog dem Anilinwasser-Gentianaviolett)

B. Safranin konz. alkoholisch

C. Fluorescein gesättigt in Nelkenöl

D. Methylgrün gesättigt wässrig

Färbevorschrift:

1. Fixieren in Müllerscher Lösung
2. Nachhärten in Alkohol einige Minuten
3. Färben in Lösung A, 5 Minuten
4. Entwässern in Lösung B
5. Übertragen in Lösung C
6. Einlegen in Nelkenöl, dann in Alkohol
7. Nachfärben mit Lösung D
8. Entwässern mit Alkohol, aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder

Malinol

Färbung nach Ölt (Ausstrichpräparate)

Erforderliche Lösungen:

1. Färben der lufttrockenen Ausstriche in Lösung A unter Aufkochen.
2. Spülen mit Wasser.
3. Differenzieren mit Lösung B, 10 Sekunden.
4. Abspülen mit Wasser.
5. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösung:

1. Auf lufttrockene, flicht fixierte Ausstriche Lösung A auftropfen (etwa 2 Tropfen).
1. Nach 30 Sekunden Farblösung ablaufen lassen.
2. 20 Tropfen Wasser dest. nachlaufen und 1 - 7 Minuten einwirken lassen.
3. Trocknen zwischen Fließpapier.
4. Einschließen in Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösungen:

1. Schnitte färben in Lösung A, 3 Minuten.
2. Kurz spülen in Lösung B.
3. Spülen in Wasser.
4. Färben in Lösung C, 5 - 10 Minuten.
5. Übertragen in Lösung D, 1 - 2 Minuten.
6. Farblösung sorgfältig abtupfen.
7. Entfärben in Anilinöl, bis keine violetten Farbwolken mehr abgehen und

der Schnitt wieder Karminfarbe zeigt.
8. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

1. Lufttrockene Ausstriche durch die Flamme ziehen.
2. Färben in Lösung A unter Erwärmen bis zum Aufkochen.
3. Reichlich mit Wasser spülen.
4. Nachfärben mit Lösung B, 5 Sekunden.
5. Abspülen mit Wasser.
6. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Kapselfärbung nach Räbiger (Darstellung der Milzbrandbazillen-Kapseln)
 
 

Notwendige Lösung:

A. Formalin conc. rein 100 ccm

1. Nicht fixierte Präparate färben in Lösung A, 20 Sekunden.
2. Abspülen mit Wasser.
3. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

Färbevorschrift:

1. Hitzefixierte Ausstriche färben in Lösung A, 10 - 20 Sekunden.
2. Kurz spülen in Wasser.
3. Gegenfärben mit Lösung B, 10 Sekunden.
4. Abspülen mit Wasser, trocknen mit Fließpapier.
5. Einschließen in Balsam oder Malinol.

Bazillenleib: braun

Polkörnchen: dunkelblauschwarz

Anm.: Pseudodiphtheriebazillen verhalten sich bei dieser Färbung negativ.

Notwendige Lösung:

A. Farblösung nach Stoltenberg

Färbevorschrift:

1. Färben der fixierten Ausstriche in Lösung A, 1 Minute.
2. Spülen mit Wasser, trocknen.
3. Einschließen in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

1. Fixieren in schwacher Hitze.
2. Färben in Lösung A, 30 - 20 Sekunden.
3. Waschen in Wasser.
4. Färben mit Lösung B, 30 Sekunden.
5. Waschen in Wasser.
6. Trocknen (Fließpapier).

Notwendige Lösungen:

1. Fixieren in Müllerscher Lösung.
2. Paraffinschnitte färben in Lösung A, 5 - 20 Minuten.
3. Spülen in Wasser.
4. Beizen in Lösung B, 1 - 2 Minuten.
5. Differenzieren in Alkohol 90 %ig, bis der Schnitt nahezu farblos erscheint.
6. Kurz spülen mit Wasser.
7. Nachfärben mit Lösung C.
8. Übertragen in Alkohol 96 %ig und absolut.
9. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösung:

A. Auramin O 0,1 g

1. Färben der fixierten Ausstriche mit Lösung A, 10 Sekunden.
2. Kräftig spülen in sehr weichem Leitungswasser oder n/10 Ammoniaklösung

etwa 10 Sekunden.
3. Trocknen an der Luft oder zwischen faserfreiem Fließpapier.

Färbung nach Ziehl-Neelsen (Ausstrichpräparate)

Notwendige Lösungen:

1. Fixieren der Sputumausstriche in der Hitze.
2. Färben mit Lösung A, 3 - Minuten, erwärmen bis zur Blasenbildung.
3. Waschen in Wasser.
4. Entfärben mit Lösung B, bis nur noch ein rosa Farbton sichtbar ist.
5. Waschen in Wasser.
6. Gegenfärben mit Lösung C.
7. Waschen in Wasser.
8. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösungen:

1. Auftropfen der Lösung A auf das lufttrockene Präparat und einmal bis zur

Blasenbildung erhitzen.
2. Abspülen mit Wasser.
3. Differenzieren mit Lösung B, 5 Minuten.
4. Spülen mit Wasser, trocknen mit Fließpapier.
5. Gegenfärben mit Lösung C, 10 - 20 Sekunden.
6. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Erforderliche Lösungen:

A. Methylviolett BB 1 g

1. Fixierte Ausstriche färben mit Lösung A unter dreimaligem Aufkochen.
2. Kräftig spülen mit Wasser.
3. Entfärben mit Lösung B, bis das Präparat grau aussieht.
4. Spülen mit Wasser.
5. Nachfärben mit Lösung C, 1 - 2 Minuten.
6. Spülen mit Wasser.
7. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbung nach Koch-Ehrlich (Schnittpräparate) Erforderliche Lösungen:
 
 

A. Carbolfuchsin

B. Salzsäure-Alkohol

C. Methylenblaulösung konz. wässrig

D. Essigsäure 0,25 %ig
G. Nelkenöl
 
 

Färbevorschrift:

1. Fixieren in Müllerscher Lösung oder aufsteigender Alkoholreihe.
2. Färben mit Lösung A bei 37° C 30 Minuten oder 12 Stunden bei Zimmertemperatur.
3. Entfärben mit Lösung B, 10 - 15 Sekunden.
4. Waschen mit Alkohol 70 %ig, bis keine Farbwolken mehr abgehen und das

Präparat farblos erscheint.
5. Nachfärben mit Lösung C, 5 Minuten.
6. Spülen in Lösung D, dann in Alkohol.
7. Aufhellen in Nelkenöl, einbetten in Balsam oder Malinol.

(Ausstrichpräparate)

Erforderliche Lösungen:

A. Acridingelb 0,2 %ig wässrig

B. Salzsäure-Alkohol
 
 

Färbevorschrift:

1. Hitzefixierte Ausstriche 30 Sekunden färben in Lösung A.
2. Spülen mit Wasser.
3. Differenzieren mit Lösung B etwa 10 - 15 Sekunden, bis das Präparat im

Tageslicht farblos erscheint.
4. Spülen mit Wasser.
5. Trocknen an der Luft oder mit faserfreiem Fließpapier.

Fluoreszenzmethode nach Hagemann-Herrmann(Ausstrichpräparate)

Notwendige Lösungen:

A. Auramin O 0,1 g

C. Kaliumpermanganatlösung 1 : 1000

D. Löffler's Methylenblau
 
 

Färbevorschrift:

1. Hitzefixierte Präparate mit Lösung A übergießen.
2. Erhitzen bis zum Blasenspringen, 5 Minuten einwirken lassen.
3. Abspülen in fließendem Wasser.
4. Differenzieren mit Lösung B, bis das Präparat farblos erscheint,

etwa 15 - 20 Sekunden.
5. Abspülen in fließendem Wasser.
6. Eintauchen in Lösung C genau 5 Sekunden.
7. Abspülen in fließendem Wasser.
8. Eintauchen in Lösung D, 1 Sekunde.
9. Spülen mit Wasser, trocknen zwischen faserfreiem Fließpapier.

Fluoressenzmethode nach Bachmann und Finke (Schnittpräparate)

Notwendige Lösungen:

1. Entparaffinierte Schnitte kräftig spülen mit Wasser.
2. Färben mit Lösung A, 15 Minuten.
3. Spülen mit Wasser.
4. Differenzieren mit Lösung B, 3 Minuten. (Nach 90 Sekunden die Lösungerneuern.)
5. Spülen mit Wasser.
6. Färben mit Lösung C, 30 Sekunden.
7. Spülen mit Wasser.
8. Vorsichtig trocknen mit faserfreiem Fließpapier.
9. Bei Dauerpräparaten: Einbetten in fluoreszenzfreiem Cedernholzöl und im

Dunkeln aufbewahren.

A. Auramin O 0,1 g

C. Thiazolgelb 0,1 g

1. Entparaffinierte Schnitte aus Wasser übertragen in Lösung A bei 37° C

für 15 Minuten.
2. Differenzieren mit Lösung B bei 37° C.
3. Spülen in Wasser.
4. Gegenfärben mit Lösung C, 2 Sekunden.
5. Spülen in Alkohol 50 %ig.
6. Abspülen in Wasser.
7. Eindecken mit Glycerin, Deckgläschen mit Wachs umranden.

1. Fixieren in der Hitze.
2. Färben mit Lösung A, 5 Minuten.
3. Entfärben mit Lösung B.
4. Spülen mit Wasser.
5. Aufgeben von Lösung C.
6. Erhitzen bis zum Blasenspringen.
7. Spülen mit Wasser.
8. Entfärben mit Lösung D.
9. Spülen mit Wasser.

10. Gegenfärben mit Lösung E, 10 - 15 Sekunden.
11. Spülen mit Wasser, trocknen, einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

A. Carbolfuchsin 1 Teil

C. Löfflers Methylenblau 1 Teil

1. Färben der fixierten Ausstriche mit Lösung A unter Erhitzen bis zum

Blasenspringen.
1. Mehrmaliges Spülen mit Lösung B.
2. Spülen mit Wasser.
3. Gegenfärben mit Lösung C einige Sekunden bis höchstens 1 Minute.
4. Abspülen mit Wasser.
5. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbung nach Unna (Schnittpräparate)

Notwendige Lösungen:

1. Celloidinschnitte färben in Lösung A, 12 Stunden.
2. Spülen in Wasser.
3. Übertragen in Lösung B, 2 Minuten.
4. Spülen in Wasser.
5. Einlegen in absoluten Alkohol bis Zur Entfärbung.
6. Spülen in Wasser.
7. Gegenfärben mit Lösung C, 5 Minuten.
8. Spülen in Wasser.
9. Entwässern in Alkohol.

Notwendige Lösungen:

1. Färben der fixierten Ausstriche in Lösung A, 1 Minute.
2. Spülen mit Wasser, trocknen zwischen Fließpapier.
3. Beizen mit Lösung B, 1 Minute.
4. Differenzieren in Alkohol, indem zunächst die Lösung B vom Präparat ge

spült und dann unter Umschwenken weiterer Alkohol aufgetropft wird,
bis keine Farbwolken mehr abgehen, Dauer etwa 30 Sekunden.

5. Nachfärben mit Lösung C, 2 Minuten.
6. Spülen in Wasser.
7. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösung:

A. Methylgrün-Pyronin, Unna-Pappenheim

Färbevorschrift:

1. Lufttrockene Ausstriche fixieren in Methylalkohol.
2. Färben in Lösung A, 3 - 5 Minuten.
3. Spülen mit Wasser.
4. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

1. Lufttrockene Präparate einmal durch die Flamme ziehen (Ausstrich nach

oben), abkühlen lassen.
2. Färben mit Lösung A, 15 - 30 Sekunden.
3. Spülen mit Lösung B.
4. Spülen mit Alkohol.
5. Aufgießen von neuem absolutem Alkohol
6. , das Aufgießen muss außerhalb

des Ausstriches vom Rande des Objektträgers aus erfolgen und wird
wiederholt, bis die Entfärbung vollendet ist.
7. Nachfärben mit Lösung C, 15 - 30 Sekunden.
8. Spülen mit Wasser.
9. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösung:

1. Färben der fixierten Ausstriche in Lösung A, 5 - 15 Sekunden
2. Kurz spülen in Wasser
3. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol

Färbung nach Unna-Pappenheim (Schnittpräparate)

Notwendige Lösung:

A. Carbol-Methylgrün-Pyronin-Lösung

Färbevorschrift:

1. Färben der nicht aufgeklebten Schnitte mit Lösung A, 5 - 10 Minuten in

Reagensgläsern, die in Wasser von 30 - 40° C gestellt werden.
2. Rasch abkühlen durch Einstellen in kaltes Wasser.
3. Waschen in Wasser, bis das zuerst grünliche Wasser blaurötlich wird.
4. Schnitte aufkleben.
5. Leicht trocknen mit Fließpapier.
6. Eintauchen in Alkohol, bis keine rote Farbe mehr abgeht.
7. Aufhellen in Xylol 30 Sekunden, einbetten in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösung:

1. Hitzefixierte Präparate färben in Lösung A, 5 Minuten.
2. Spülen mit Wasser, trocknen.

Färbung nach Babes (Ausstrichpräparate)

Notwendige Lösungen:

1. Färben der fixierten Ausstriche in Lösung A, 5 Minuten.

2. Übertragen in Lösung B, 10 Stunden.

3. Einlegen in Lösung C, 1 Minute.

4. Differenzieren in absolutem Alkohol.

5. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.
 
 

Färbeergebnis:

Notwendige Lösungen:

A. Bismarckbraun-Lösung

B. Anilinwassergentianaviolett

C. Jodjodkaliumlösung, Gram

D. Anilin

E. Säurefuchsin 0,2 %ig wässrig

Färbevorschrift:

1. Vorfärben der Paraffinschnitte in Lösung A.
2. Kurz spülen in Wasser.
3. Färben in Lösung B, 5 Minuten.
4. Spülen in Wasser, trocknen mit Fließpapier.
5. Übertragen in Lösung C, 1 - 3 Minuten.
6. Trocknen mit Fließpapier.
7. Entfärben mit Lösung D, bis keine Farbe mehr abgeht.
8. Einlegen in Alkohol, 2 - 5 Minuten.
9. Gegenfärben mit Lösung E, 3 Minuten.

10. Abspülen in Wasser, 2 Minuten.
11. Entwässern in Alkohol.
12. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

1. Fixieren der Ausstriche in der Hitze.
2. Färben mit Lösung A, 30 - 60 Sekunden.
3. Erhitzen bis zur Blasenbildung.
4. Auswaschen des Farbüberschusses unter fließendem Wasser, 30 Sekunden
5. Färben in Lösung B, 30 Sekunden.
6. Waschen unter fließendem Wasser.
7. Trocknen (Fließpapier).

Sporen: grün

Zellen: rot

Lit.: Wirtz, R. (1908), Centbl. Bakt., I. Abt., Orig., 46, 727 - 728
 
 

Notwendige Lösungen:

A. Malachitgrün 5,0 g

1. Hitzefixierung.
2. Bedecken mit Lösung A, 20 Sekunden aufkochen, weitere 30 Sekunden

einwirken lassen.
3. Spülen in Wasser.
4. Gegenfärben mit Lösung B, 1 Minute.
5. Spülen mit Wasser, trocknen, einschließen in neutralem Balsam oder Malinol

Notwendige Lösungen:

A. Chromsäurelösung 5 %ig

B. Carbolfuchsin

C. Schwefelsäure 5 %ig

D. Methylenblaulösung wässrig
 
 

Färbevorschrift:

1. Fixierte Ausstriche werden zunächst 2 Minuten mit Chloroform über

gossen, um etwaige Fettröpfchen, die nach der Färbung Sporen vor
täuschen .könnten, zu entfernen.
2. Abspülen mit Wasser.
3. Einlegen in Lösung A, 2 Minuten.
4. Abspülen mit Wasser.
5. Färben mit Lösung B, 1 Minute.
6. Differenzieren in Lösung C.
7. Abspülen mit Wasser.
8. Gegenfärben mit Lösung D, 30 Sekunden.
9. Abspülen mit Wasser dest.

Notwendige Lösung:

A. Astraviolett 2 %ig wässrig

Färbevorschrift:

1. Lufttrockene Ausstriche auf sorgfältig gereinigten Objektträgern bedecken

mit Lösung A, 3 - 5 Minuten.
2. Vorsichtig Erwärmen.
3. Spülen mit Wasser, trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbung nach Becker (Ausstrichpräparate)

Notwendige Lösungen:

A. Rugesche Lösung: Formalin 20 ccm

Eisessig 1 ccm

Wasser 100 ccm

B. Tannin 10 g

Färbevorschrift:

1. Dünne lufttrockene Ausstriche von Reizserum fixieren in Lösung A,

unter 2 - 3 maligem Wechsel für die Dauer von 1 Minute.
2. Spülen in Wasser, 10 Sekunden.
3. Beizen in Lösung B unter Erwärmen (nicht über 50° C) 30 Sekunden
4. Spülen in Wasser, 30 Sekunden.
5. Färben in Lösung C unter leichtem Erwärmen, 30 - 45 Sekunden
6. Abspülen mit Wasser.
7. Trocknen, einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Spirochaeta pallida und RekurrenZspirochaeten: intensiv rot

Anm.: Die steilen Windungen der Pallidaspirochaeten bleiben gut erhalten.
 
 

Negativdarstellung nach Burri

Notwendige Lösung:

A. Burri-Tusche

Färbevorschrift:

1. Einen Tropfen Reizserum oder einen Tropfen des von der Schnittfläche

eines Organes abgestreiften Saftes auf einem Objektträger mit einem
Tropfen dest. Wasser und einem Tropfen Burri-Tusche verreiben.
2. Gemisch mit dem Rande eines Objektträgers oder Deckgläschens in dünner

Schicht möglichst gleichmäßig ausstreichen.
3. An der Luft trocknen lassen, etwa 30 - 60 Sekunden.
4. Mit Ölimmersion untersuchen.

Notwendige Lösung:

1. Einen Tropfen Untersuchungsmaterial mit einem Tropfen Lösung A auf einem

Objektträger möglichst gleichmäßig verreiben und in dünner Schicht ausstreichen.
2. An der Luft trocknen lassen.
3. Mit Ölimmersion untersuchen.

Notwendige Lösung:

1. Fixieren der lufttrockenen, möglichst dünnen Ausstriche mit Methylalkohol
2. , 5 Minuten.
3. Färben mit Lösung A, 10 - 15 Sekunden.
4. Spülen mit Wasser, bis das Präparat einen grünlichblauen Farbton angenommen hat.
5. Trocknen mit Fließpapier.
6. Sofort untersuchen mit Ölimmersion oder einschließen in neutralem Balsam oder Malinol

Notwendige Lösung:

A. Azur-Eosin-Lösung Giemsa

Färbevorschrift:

1. Fixieren der lufttrockenen, sehr dünnen Ausstriche in Methylalkohol,

2 - 3 Minuten oder Alkohol absolut. 15 - 20 Minuten.
2. Abtupfen mit Fließpapier.
3. Färben mit Lösung A (10 Tropfen auf 10 ccm absolut neutrales Wasser) 30 - 40 Minuten.
4. Gut spülen mit Wasser.
5. Trocknen zwischen Fließpapier.
6. Einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

A. Azur-Eosin-Lösung

B. Pufferlösung nach Weise

C. Natriumcarbonatlösung 1 %ig wässrig

D. Natriumphosphat (NaH₂PO₄ • 2 H₂O) 0,1% ig wässrig

5. Eosin 0,1%ig wässrig(verdünnen aus 2%)

Färbevorschrift:

Da die Präparate bereits durch den langen Aufenthalt über Chlorkalzium hinreichend fixiert
sind, sofort

1. Färben in verdünnter Azur-Eosin-Lösung (10 Tropfen Lösung A auf 10 ccm Lösung B und 1 Tropfen Lösung C) 45 Minuten.
2. Kräftig abspritzen mit Wasser.
3. Differenzieren in Lösung D, der vor Gebrauch auf je 10 ccm 2—3 Tropfen Lösung E zugesetzt wird. Die Einwirkungsdauer beträgt 1 - 4 Minuten.

Die Differenzierung ist beendet, wenn der blaue Farbton des Ausstriches in rötlich-braun übergegangen ist. Ein reiner Eosinton zeigt Überdifferenzierung an und ist zu vermeiden.
4. Abspülen mit Wasser.
5. Trocknen, einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Methode des dicken Bluttropfens, zum Nachweis spärlicher Parasiten.

Notwendige Lösung:

1. Auf einem gründlich gereinigten Objektträger lässt man einen dicken Tropfen Blut an der Luft trocknen, 1 - 2 Stunden.
2. Nicht fixiertes Präparat übergießen mit Lösung A (verdünnt 10 Tropfen auf 10 ccm Wasser dest.).
3. In horizontaler Lage Auftreten von gelben Haemoglobinwolken nach 2 - 3 Minuten.
4. Frische verdünnte Lösung A von einer Seite aus zugießen und alte Lösung dadurch abschwemmen. Nun färben 30 - 60 Minuten.
5. Abspülen mit Wasser, trocknen durch Senkrechtstellen des Objektträgers (kein Fließpapier).
6. Untersuchen mit Ölimmersion.

Notwendige Lösungen:

A. Azur-Eosin-Lösung, Giemsa

B. Essigsäure 0,5 %ig

Färbevorschrift:

1. Fixieren in Alkohol absolut., einbetten in Paraffin.
2. Herstellen sehr dünner Schnitte.
3. Färben mit Lösung A (verdünnt 10 Tropfen auf 10 ccm Wasser dest.) in zugedeckter Schale 20 - 24 Stunden.

4. Abspülen mit Wasser.
5. Differenzieren mit Lösung B, bis der Schnitt rötlich erscheint.
6. Auswaschen in Wasser, trocknen zwischen Fließpapier.
7. Differenzieren in absolutem Alkohol, bis der Schnitt blassblau erscheint.
8. Abtrocknen, aufhellen inXylol, einschließen in Balsam neutral oder Malinol.

Färbeergebnis:

Färbung nach Jäger (Ausstrichpräparate)

Notwendige Lösungen:

A. Sublimatlösung 1 %ig 100 ccm

C. Haemalaun, sauer

D. Eosin 0,1% ig wässrig (verdünnen aus 2%)
 
 

Färbevorschrift:

1. Fixieren der feuchten Ausstriche in Lösung A, 12 Minuten.
2. Einlegen in 70 %igen Alkohol, dem Lösung B bis zur blassgelben Färbung.zugesetzt ist,

10 - 15 Minuten.
3. Abspülen mit Wasser.
4. Färben in Lösung C, 10 Minuten.
5. Abspülen mit Leitungswasser, bis ein blauer Farbton hervortritt.
6. Nachfärben mit Lösung D, 1 - 2 Minuten.
7. Entwässern in Alkohol, übertragen in Xylol.
8. Einschließen in neutralem Balsam oder Malinol.

Notwendige Lösungen:

A. Sublimatlösung 1 %ig 100 ccm

C. Haemalaun, sauer

D. Safranin 0,1 %ig wässrig
 
 

Färbevorschrift:

1. Fixieren des Materials möglichst rasch nach dem Tode in Lösung A, 1 Stunde oder länger.
2. Abspülen mit Wasser
3. Behandeln mit Alkohol 70% ig, dem soviel Lösung B zugesetzt wird, bis eine blassgelbe Tönung auftritt.
4. Einbetten in Paraffin, aufkleben, entparaffinieren.
5. Färben mit Lösung C, 10 - 15 Minuten.
6. Abspülen mit Wasser, bis ein blauer Farbton hervortritt.
7. Nachfärben mit Lösung D, 2 - 3 Minuten.
8. Entwässern in Alkohol, aufhellen in Xylol.

Färbeergebnis:

1. Ein Teil Trichomonadeneiter mit drei Teilen Lösung A verreiben.
2. Eine Öse mit einem Durchmesser von 4 - 6 mm des aufgeschwemmten.Eiters auf ein Deckglas bringen und dahinein einen Tropfen der verdünnten Lösung B verreiben.
3. Präparat mit mittelstarkem Trockensystem untersuchen.

Notwendige Lösung:

1. Fixieren der lufttrockenen Ausstriche in Methylalkohol.
2. Spülen mit Wasser.
3. Anhaftende Wasserreste abschwenken (nicht abtrocknen).
4. Lösung A auftropfen, bis Zur Dampfbildung erhitzen.
5. Präparat in der warmen Farblösung hin und her bewegen.
6. Farblösung abgießen, Färbung noch zweimal mit neuer Farblösung wiederholen.
7. Abspülen mit Wasser.
8. Trocknen, Deckglas auflegen.

Notwendige Lösungen:

A. Eosin-Methylblau nach Mann

B. Alkohol absolut 30 ccm

1. Fixieren möglichst dünner Schnitte aus dem Ammonshorn in Alkohol bei 37° C,

30 - 40 Minuten.
2. Einbetten in Paraffin (Schnelleinbettung).
3. Schneiden, aufkleben, entparaffinieren.
4. Färben in Lösung A, 30 - 240 Sekunden.
5. Kurz abspülen in Wasser.
6. Abspülen in absolutem Alkohol.
7. Einlegen in Lösung B, 15 - 20 Sekunden.
8. Kurz abspülen in Alkohol.
9. Abspülen in Wasser, 1 Minute

10. Einlegen in Lösung C, 1 - 2 Minuten.
11. Entwässern in Alkohol.
12. Aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Der Erreger selbst ist unbekannt. Impft man von einer Pockenpustel mit einem feinen Schnitt die Cornea eines Kaninchens, so macht sich nach 2 Tagen eine weißliche Trübung bemerkbar und bei der mikroskopischen Untersuchung findet man in den Hornhautepithelien runde Gebilde, die Guarnierischen Körperchen. Dieselben Gebilde finden sich auch nach Impfung der Hornhaut mit Vaccine-lymphe, nicht aber nach der Impfung mit dem Inhalt der Varicellenbläschen. Die Guarnierischen Körperchen sind für Variola spezifisch. Paschen gelang in der Pockenpustel der Nachweis überaus kleiner runder Körperchen = Paschen'sche Elementarkörperchen.
 
 

Färbung nach Paschen (Ausstrichpräparate)

Erforderliche Lösungen:

1. Variolapustel mit Deckglas anritzen, austretenden Gewebesaft mit der Kante eines Deckglases unter leichtem Druck aufnehmen und nach Art eines Blutausstriches auf einem Objektträger ausstreichen.
2. Vollständig an der Luft trocknen lassen, Dauer etwa 12 - 24 Stunden.
3. Fixieren in Alkohol absolut, 1 - 10 Stunden oder in Methylalkohol 5 - 10 Min.
4. Beizen in A 3 Minuten unter Erwärmen, bis eben Dämpfe aufsteigen.
5. Abspülen in Wasser.
6. Färben in B unter Erwärmen für 2 - 4 Minuten.
7. Abspülen in Wasser, trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Elementarkörperchen dunkelrot gefärbt auf hellrotem Grunde.

Anm.: Die Methode nach Paschen eignet sich für Kinderlymphe, Variolapustelinhalt und
Klatschpräparate der infizierten Kaninchenhornhaut.
 
 

Färbung nach Sorgenfrei (Schnittpräparate)

Erforderliche Lösungen:

A. Chromosmiumessigsäure nach Flemming.

Färbevorschrift:

1. Abschaben eines kleinen Fetzens verdickten Hornhautepithels von der mit

5%iger Cocainlösung unempfindlich gemachten Hornhaut.

2. Fetzen in einem Tropfen 1 %iger Essigsäure schnell unter Präpariermikroskop oder Präparierlupe zerzupfen, bis kleinste, dünnste, nur aus 2 - 3 Zellagen zusammen-gesetzte Epithelhaufen entstehen.
3. Essigsäure mit Fließpapier vorsichtig absaugen.
4. Fixieren in A für 15 Minuten.
5. Aus waschen in fließendem Wasser für 10 Minuten.
6. Färben in B für 15 Minuten.
7. 10 - 15 Minuten auswaschen in Wasser.
8. Nachfärben in C für 30 Sekunden.
9. 10 - 15 Minuten beizen und differenzieren in D.

10. Abspülen in Alkohol, bis ein Umschlag nach Violett erfolgt
11. Aufhellen in Xylol, einschließen in Balsam oder Malinol

Erforderliche Lösungen:

1. Hornhautfetzen, wie vorstehend präpariert, fixieren in Chromosmiumessigsäure nach Flemming (30202) 15 Minuten.
2. Abspülen in Wasser für 10 - 15 Minuten.
3. Färben in B, mit der gleichen Menge dest. Wasser verdünnt für 24 Stunden.
4. Abspülen in Wasser.
5. Differenzieren in A unter Kontrolle mit dem Mikroskop, bis Zcllsubstanzen hell erscheinen.
6. Abspülen in Wasser.
7. 3 - 5 Minuten färben in C.
8. Kurz abspülen in Wasser, etwa 30 Sekunden.
9. Entwässern in Alkohol, aufhellen in Xylol.

Färbung nach Castaneda (Ausstrichpräparate)

Erforderliche Lösungen:

A. 23,86 g Dinatriumphosphat werden in 1 Liter dest. Wasser gelöst.

B. 11,34 g Monokaliumphosphat werden in 1 Liter dest. Wasser gelöst.

C. Pufferlösung = 88 ml A gemischt mit 12 ml B.

D. Methylenblaulösung nach Löffler.

E. 0,5 %ige Lösung von Safranin O in dest. Wasser.
 
 
 
 

Färbevorschrift:

1. Lufttrockene Ausstriche von verdächtigen Kleiderläusen 5 Minuten fixieren

in Methylalkohol.
2. Färben in einem Gemisch aus:

3. Abspülen in Wasser für 30 Sekunden.
4. Gegenfärben in E für 1 - 2 Minuten.
5. Kurz abspülen in dest. Wasser.
6. Trocknen und einschließen in Balsam oder Malinol.

Färbung nach Castaneda (Ausstrichpräparate)

Erforderliche Lösungen:

1. Lufttrockene Exsudat-Ausstriche fixieren in Methylalkohol für 5 Minuten
2. Färben in einem Gemisch aus:

3. Kurz abspülen in dest. Wasser, etwa 30 Sekunden.
4. Gegenfärben in Safraninlösung E für 2 Sekunden.
5. Abspülen in dest. Wasser.
6. Trocknen, einschließen in Balsam oder Malinol.

Anm.: Da die Infektionsgefahr sehr groß ist, dürfen Untersuchungen auf Psitta-

Lit.: Harald Mohs, Zbl. Bakter. I Orig., Bd. 136, H 1/2 (1936).
 
 

Färbung nach Herzberg (Ausstrichpräparate)

Notwendige Lösung:

1. Färben in Lösung A, 3 - 10 Minuten.
2. Spülen in Wasser dest. unter leichtem Bewegen, 30 Sekunden.
3. Erneut spülen mit dest. Wasser.
4. Trocknen, untersuchen mit Ölimmersion.

Elementarkörperchen je nach Art: hell-, dunkel- bis schwarzblau
 
 

Anm.: Durch Zusatz von 0,25 ccm gesättigter Zitronensäurelösung zu 5 ccm frisch filtrierter Farblösung kann die Färbekraft verstärkt werden.
 
 
 
 

Fluoreszenzmethode nach Hagemann (Ausstrichpräparate)

Notwendige Lösung:

1. Lufttrockene, möglichst dünne Ausstriche färben mit Lösung A, 15 Sekunden
2. Abspülen mit Wasser, trocknen

1. Fixieren in Bouin oder Helly, einbetten in Paraffin.
1. Aufkleben der Schnitte, entparaffinieren, durch absteigende Alkoholreihe

einlegen in Wasser.
2. Färben in Lösung A, 2 Minuten.
3. Waschen mit fließendem Wasser, 10 Minuten.
4. Färben mit Lösung B, 3 - 5 Minuten.
5. Abspülen mit Wasser.
6. Entwässern, aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.

Muskelgewebe: gelb

Lit.: Weigert, K. (1904), Ztschr. f. wiss. Mikr., 21 : 1
 
 

1. Fixieren in Formalin, Zenker, Helly oder Bouin, einbetten, entparaffinieren,

durch absteigende Alkoholreihe einbringen in Wasser.
2. Übertragen und färben in Lösung A, 3 - 5 Minuten.
3. Spülen in Wasser.
4. Differenzieren mit Lösung B.
5. Waschen in fließendem Wasser, 10 Minuten.
6. Färben in Lösung C, 5 Minuten.
7. Spülen mit Wasser.
8. Differenzieren mit Lösung B.
9. Abwischen der Unterfläche und freien Oberfläche des Objektträgers mit Filtrierpapier.

Bindegewebe: gelb

Lit.: Wallart, J. & Houette, Ch. (1934), Bull. Hist.appl., 12 B. 254 - 256.55
 
 
 
 

A. Aldehydfuchsin-Gebrauchslösung: = Aldehydfuchsin-Stammlösung

1. Fixieren in Bouin, Zenker oder Formalin.
2. Entparaffinieren und einlegen in 70 %igem Alkohol.
3. Färben in Lösung A, 30 Minuten.
4. Waschen in 70 %igem Alkohol, übertragen in Wasser.
5. Färben in Lösung B, 15 Minuten.
6. Waschen in Wasser.
7. Differenzieren in 70 %igem Alkohol (bis keine Farbabscheidung mehr erfolgt).
8. Färben in Lösung C, 5 Minuten.
9. Waschen in 95 %igem Alkohol.
10. Entwässern, aufhellen in Xylol, einbetten in Balsam oder Malinol.